La seguridad de L-5-MTHF-Ca se evaluó mediante pruebas de genotoxicidad, toxicidad subcrónica y de desarrollo prenatal. En ensayos in vitro, L-5-MTHF-Ca no fue mutagénico y no indujo otros eventos cromosómicos. 

L-5-MTHF-Cano es teratogénico ni embriotóxico. Según los resultados de los estudios in vitro e in vivo, se respalda el uso seguro de L-5-MTHF-Ca como ingrediente en los alimentos. El nivel sin efectos adversos observados fue la dosis más alta en el estudio de toxicidad subcrónica, es decir, 400 mg/kg de peso corporal/día para ratas macho y hembra.

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